2022年度猪肉中克伦特罗检测

下面是小编为大家整理的2022年度猪肉中克伦特罗检测,供大家参考。希望对大家写作有帮助!

猪肉中克伦特罗的检测3篇

猪肉中克伦特罗的检测篇1

盐酸克伦特罗快速检测试剂盒

产地：比利时Bio-X

1.检测原理 8. 工作液的准备

2.操作时间 9. 样品前处理

3.检测下限 10. 酶联免疫实验设计

4.回收率 11. 操作步骤

5.交叉反应率 12. 结果计算

6.试剂盒的组成 13. 结果分析

7.需要设备及试剂 14.注意事项

简介：

克伦特罗（Clenbuterol）属于beta兴奋剂，是一种高选择性的兴奋剂和激素，具有水解脂肪、合成代谢和对非条纹肌肉组织的松弛作用。进年来被一些人非法添加到饲料中以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物的生长。当用作生长调节剂时，其添加量是治疗量的5—10倍，常在动物体内残留而给消费者带来危害。

通常，HPLC或GC-MS是克伦特罗残留检测的确证方法，但是其前处理步骤费用昂贵，而ELISA快速检测试剂盒因成本低、操作简便、速度快、一次检测样本量大、仪器化低，现已成为常规的筛选方法。

1.检测原理：

测定的基础是抗原抗体反应。微孔板上包被有抗兔IgG（Clenbuterol抗体）的羊抗体，含有克伦特罗抗原的样品或标准品与酶标记物被加入到小孔中，经过孵育及洗涤步骤后，游离的抗原与抗原酶标记物竞争抗体结合位点，没有结合的抗原酶标记物在清洗步骤中被除去，将显色液加入到孔中并且孵育，结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转为黄色。在450nm处测量，吸光强度与样品的克伦特罗浓度成反比。

2.操作时间：
1小时(30分钟孵育+30分钟显色)

3.检测下限：
0.1ppb

4.回收率：

尿样和血清：
97-110%

饲料：
95-100%

肝脏/组织：
90-97%

牛奶及奶粉 100%

5.交叉反应率：

Clenbuterol (克伦特罗) 100%

Mabuterol（马普特罗） 100%

Mapenterol（马喷特罗） 100%

Salbutamal (沙丁胺醇) 8-9%

Terbutalin (特普他林) 7-8%

Simarterol(塞曼特罗)

猪肉中克伦特罗的检测篇2

综述盐酸克伦特罗的

药理作用、在机体内的残留性及检测技术

摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。

关键词：理化性质；
药理作用；
毒性；
残留性；
检测方法

瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。

1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用

1.1 理化性质

中文名：瘦肉精；
克伦特罗；
学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl；

图1 盐酸克伦特罗结构式

盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；
熔点：174～175.5°C；
溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。

1.2 药理作用

20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为 30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。克伦特罗可作为支气扩张剂治疗慢性梗塞性肺部疾病,用吸入法给药,有效剂量可低至12ug；
口服效果是特布他林的170倍，对心率和血压的影响不明显。克伦特罗进入机体后, 与广泛分布于呼吸道效应细胞膜上 的β2受体结合,导致受体构型改变,激活腺苷酸环化酶,催化细胞内 ATP转化为cAMP,后者激 活cAMP依赖性蛋白激酶,促使胞浆中游离钙浓度下降钾通道开放引起平滑肌松弛而缓解 喘息等症状除松弛支气管平滑肌外克伦特罗也激活β2肾上腺受体克伦特罗能增加神经生长 因子的表达而起到保护神经系统的作用,也能防止大鼠诱导性肝细胞凋亡。此外,克伦特罗可能具有治疗过敏性炎症的作用并可以在抑制失神经肌萎缩的同时不影响或很少影响正常肌 肉和心脏,促进神经修复后肌肉功能的恢复等多种生理功能[2]。

2. 盐酸克伦特罗的毒性

20 世纪80年代初人们发现在肉用动物生产中每天使用克伦特罗1000～3000ug具有促进肌 肉发育和脂肪分解的作用,可明显提高饲料的利用率和瘦肉率,具有能量重分配的作用。其机理是高剂量克伦特罗通过作用于骨骼肌的β-2肾上腺受体,引起肌肉中环磷酸腺苷和乳酸浓度 的快速升高,肌糖元浓度下降,加快肌肉蛋白质的合成速度长期连续使用能增加肌肉体积、增加体重。对心肌和后肢肌肉影响最明显,使左心室比目鱼肌和深浅腓肠肌肌纤维显著性增大。但在猪等肉用牲畜中投喂克伦特罗,即使是屠宰前停药肝肺中仍可检出较高浓度的克伦特罗。肉中的克伦特罗可使人体出现多种毒副作用,导致体内聚胺浓度升高而继发心脏肥大。一次性摄入克伦特罗的量过大,可迅速造成心率过速,对原有心律失常的病人更易发生心脏反应，严重时可出现心肌梗死。同时,由于激活Na+ - K +- ATP酶, 使K +进入细胞内引起血钾降低 , 从而导致心律失常.克伦特罗通过增加肌糖原的分解,引起血乳酸丙酮酸升高并可出现酮体。容易引起糖尿病人代谢紊乱,导致酮症酸中毒或乳酸中毒。大鼠毒理试验表明，使用2000 μg/kg-d的高剂量克伦特罗,可极大地降低体内牛磺酸的贮备,使肌纤维受损。此外，克伦特罗对生殖系统的影响可表现为降低子宫重量、增强子宫和阴道黏膜上皮细胞的分泌功能[3]。

盐 酸 克 伦 特 罗 在 胃 肠 道 吸 收 快 ,15～20min即起作用,2～3h 血浆浓度达峰 值,一般健康人食用20ug药效会有所表现,5～10倍的摄人量则会导致中毒，症状为:心率加速,脸色潮红,胸闷,心悸,头痛,发热,寒战,盐酸克伦特罗激动人体骨骼肌β2-受体后,引起人体四肢、面、颈部骨骼肌震颤。心律失常的人，心脏反应明显,引起心室早搏,ST段与T波幅压低交感神经功能亢进的人,如高血压、青光眼、糠尿病、前列腺肥大、甲状腺机能亢进等患者更易产牛急性中毒症状。

盐酸克伦特罗长时间亚治疗剂量摄入,激索残留逐渐蓄积引起慢性毒性作用可使人体产生低敏感现象,即支气管扩张作用明显减弱 ,作用持续时间缩短,使得哮喘发生率和发病程 度增高,同时还可引起内分泌紊乱,导致血液中乳酸丙酮酸浓度升高，糖尿病人可能因此并发 酸中毒。有的学者认为盐酸克伦特罗有致癌作用，但还需要积累数据，目前还未见盐酸克伦特罗致突变、致癌的报道[4]。

3. 盐酸克伦特罗残留分布规律

图2 盐酸克伦特罗在组织中残留分布

盐酸克伦特罗在肌肉 、肝脏 、肾脏以及血浆中的残留量（图2）进行分析比较 ，结果显示 ，在同一浓度的饲料添加剂中 ，盐酸克伦特罗在猪体内残留量大小顺序为肝脏>肾脏>肌肉>血浆，而且 ，随着添加浓度的增加，在组织中的残留量也随即增加，两者之间呈正比关系[5]。

4. 盐酸克伦特罗的检测方法

4.1 感官检验

猪屠宰后，可以从肉的颜色和品质上来判断是否含有盐酸克伦特罗，如果肉色泽鲜红，松软，后臀肌饱满突出，脂肪层非常薄，胴体两侧腹股沟脂肪层内毛细血管分布密集，甚至充血，就可怀疑这样的猪肉里含有盐酸克伦特罗[6]。

4.2 色谱检测

4.2.1 高效液相色谱法

高效液相色谱法（HPLC）具有检测精确度高、假阳性率低的特点，检测盐酸克伦特罗残留的最低检测限为1～15 μg/kg，国内已将高效液相色谱法作为检测盐酸克伦特罗残留的半确证性方法。

赵榕等[7]（2000）运用反相高效液相色谱法测定猪肝中的盐酸克伦特罗，在243 nm的检测波长下，用waters-alliance 高效液相色谱系统进行检测，流动相为甲醇和磷酸二氢钠水溶液（35+65），最后再根据保留时间R值初步定性，扫描光谱进一步确证，根据试样峰高或峰面积与标准峰高或峰面积较进行定量。当试样取样量为2.0 g时，该法的最低检出浓度为0.25mg/kg。苗虹等[8]（2001）将样品匀浆后用盐酸溶液超声加热提取，再用异丙醇:乙酸乙醋（40∶60）萃取，有机相浓缩后，用弱阳离子交换柱进行分离用乙醉-氨（98∶2）溶液洗脱，洗脱液以流动相（甲醇和0.01 mol/L KCl溶液以45∶55的比例配合）定容后，用美国Agilent1100 高效液相色谱仪系列进行检测，检测限达0.5g/kg。蔡玉枝等[9]（2002）运用高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量，采用了Dianon sil C18 200×4.6 mm 的色谱柱，流动相为 0.01 mol/L NaH2PO4：甲醇（67∶33）,二极管阵列检测器，检测波长为243 nm。采用外标法，以保留时间定性，并以盐酸克伦特罗的特征紫外吸收光谱对照样品的扫描光谱进行确认，然后根据样品峰面积计算盐酸克伦特罗含量。还有人先用C18二氧化硅硅胶柱净化，用HPLC分离，再结合HPLC/ELISA检测、确证[10-12]。高效液相色谱的缺点是检测过程烦琐、检测时间长,需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。

4.2.2 气象色谱 - 质谱法

　 气相色谱-质谱联用法（GC/MS）可以在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性定量分析，且具有较高的灵敏度，是检测盐酸克伦特罗残留的常用的方法之一。气相色谱-质谱联用法可用于饲料、血液、组织中盐酸克伦特罗的分析，检测限为0.5μg/kg。与高效液相色谱法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，中国、欧盟及美国等国家将气相色谱-质谱联用法定为检测盐酸克伦特罗的确证性方法。

吴银良等[13]（2006）建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取-气相色谱-质谱分析方法，并且盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺的检出限分别为0.30μg/kg和1.00μg/kg。王红等[14]（2007）也简化了方法，测定了动物肝脏组织中的盐酸克伦特罗。本方法所需设备昂贵，操作繁琐，分析检测前要对分子上羟基、氨基等极性基团衍生化，难以作为常规方法应用，不能进行现场检测。

4.3 酶联免疫吸附法（ELISA ）

4.3.1 酶联免疫分析

　　目前，检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析技术是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。该方法检测下限一般1.0μg/L（尿样）、0.5μg/kg（ 组织）。使用该法，酶联免疫吸附测定法检测限尿液为0.3～1.0 ng/mL，组织为0.2～1.0 ng/mg。国内外有许多检测试剂盒，但质量不一。酶联免疫吸附测定法作为盐酸克伦特罗残留量的筛选方法具有操作简便、准确、投资小、成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点，适合对活体动物作大批量样品的快速分析；
缺点是仍不能实现现场检测，且该法检测结果假阳性率较高，尤其当样品中含有抗生素或磺胺类药物时，会使假阳性率进一步提高[15]。

4.3.2 放射免疫分析技术

Ropitar和Zimmer首次报道用于β-2肾上腺素能激动剂的放射免疫测定程序和动物组织中盐酸克伦特罗的药理学研究。Delahaut等[16]描述了建立更为特异的放射免疫方法，其中抗盐酸克伦特罗的抗体对其他β-2肾上腺素能激动剂的交叉反应小于10%，最低检测限可达到0.5 ng/g。目前国外已生产出测定盐酸克伦特罗的试剂盒产品，还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法，这是用受体代替抗体结合盐酸克伦特罗，检测限可达到2.4 ng/g。

放射免疫分析技术虽然具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速、易标准化、技术成熟等优点。但仪器价格昂贵和必须使用放射性同位素作为标记物，存在着辐射防护及防止污染的问题，且试剂盒使用时间短，而且每次操作都要做标准曲线，可测量范围相对较窄，难以实现操作及测量的自动化等。

4.4 滴金免疫技术

原理通过盐酸克伦特罗CL（或莱克多巴胺RAC）与CL-BSA（盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白）偶联物（或RAC-BSA）竞争结合抗CL（或RAC）单克隆抗体-胶体金复合物，使试纸上反应线颜色变化，以判定样品中CL（或RAC）的含量。当检样中CL（或RAC）浓度低于最低检测水平时，胶体金中的抗CL（或RAC）单抗-胶体金复合物与T线上的CL-BSA偶联物（或RAC-BSA）结合，T线呈色与C线相近：当检样中CL（或RAC）浓度大于5ng/mL 时，抗CL（或 RAC）单抗 -胶体金复合物与CL（或RAC）结合，T线显色比C线浅或完全看不到线，且CL（或RAC）浓度越高T线显色越浅，从而作出判定。滴金免疫技术具有简便易行、快速、试剂安全、特异性高、可单份测定、不需要特殊仪器和设备等优点，且金标试剂比酶试剂更稳定，冷冻干燥后可长期保存，便于常规应用。

4.5 时间分辨荧光免疫分析技术

时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是一种新型的超微量的非放射性标记免疫分析技术，它以镧系元素为标记物。时间分辨荧光免疫分析技术集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身，且克服了酶标记物的不稳定性、化学发光仅能一次发光且易受环境干扰和电化学发光的非直接标记等缺点，降低了非特异性信号，达到了极高的信噪比，大大地超过了放射性同位素所能达到的灵敏度，且还具有标记物制备方便、储存时间长、无放射性污染检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、应用范围广泛等优点。因此，越来越受到人们的关注。目前，国内外应用于盐酸克伦特罗检测的时间分辨荧光免疫分析技术的报道还较少，随着技术的越来越成熟，其应用将更广泛。如果研制成检测盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫分析技术试纸条，将可对盐酸克伦特罗的残留进行现场检测 [16]。

4.6 生物传感技术

将生物技术与微电子技术相结合，利用生物体内抗原、抗体专一性结合而导致电化学变化设计成免疫生物传感器。将CL（或RAC）抗体微型化膜固定于换能器（工作电极）表面，测定时在待测样品溶液中加入已知浓度的酶标激素，CL（或 RAC）与标记抗原竞争性地结合电极上的抗体，使经洗涤后的电极与底物溶液接触，标记酶催化底物发生相应的化学变化，转变为电信号输出，输出显示和数据处理系统将信息进行数据处理和输出，直接显示测得CL（或 RAC）的含量。

国外已有用生物传感器技术检测CLB残留的资料报道, 如 Pizzariello Andrea 应用分子印迹聚合膜（MIP）作为分子识别系统，选择固相基质复合电极（SBMCE）作为换能器，微分脉冲电压电流表（DPV）作为输出显示装置检测牛肝脏中CLB残留，结果此方法特异性强，与其他同类物质交叉反应低，缺点是反应时间较长，灵敏度还有待于提高[17]。目前酶免疫传感器的灵敏度达 0.01μg/kg，而且可在几分钟之内完成检测全过程。目前研制成功的检测盐酸克伦特罗的酶免疫传感器，检测限为0.3μg/kg，可 在10 min内完成检测全过程，且传感器体积小（15 cm×7 cm×2 cm），便于携带和实现现场检测 [18]。生物传感器具有选择性好、响应速度快、样品用量少、操作简易、价格低廉、定量准确，且其结构简单、体积小、携带和使用方便、可以实现连续的在线检测和反复使用等优点。

4.7 毛细管电泳法

Gausephol 和 Blaschke（1998）应用毛细管区带电泳法检测人尿中盐酸克伦特罗的残留，最低检测限达到0.5 μg/L，而且精确度和准确度均符合生物样品中残留物的检测标准[19]。毛细管区带电泳法分离效率可达几百万理论塔板数，操作简便，快速，所需样品量极少，而且灵活性大，许多分离参数可以调节，但是所需仪器非常昂贵和复杂。

参考文献

[1] 徐聪.瘦肉精的危害与畜产品食品安全.黑龙江畜牧兽医，2011,7:49-51.

[2] 张吟，陈一农. 克仑特罗药理作用的研究进展.海峡药学，2012,14（5）:10-12.

[3] 侯仕农，闫强，马爱民. 盐酸克伦特罗的药理作用、对食品安全的危害和检测技术.内蒙古农业科技，2006（6）:29-32.

[4] 郭明星.克伦特罗与食品安全.食品安全，2002,10:19-23.

[5] 张锦江，葛长荣. 盐酸克伦特罗在动物血浆与组织间残留量的相关性分析及其在体内的残留.分布规律研究.广东农业科学，2011（12）:105-112.

[6] 孙凌志,陈庆勋.“瘦肉精”猪肉的简易检验法 [J].中国动物检疫 ,2002,19(1):43.

[7] 赵榕,吴国华,涂晓明.反相高效液相色谱法测定猪肝中盐酸克伦特罗[J].中国食品卫生杂志 ,2000,12(2):22-24.

[8] 苗虹,赵云峰,赵京玲,等.测定动物食品中盐酸克伦特罗残留的标准操作程序[C].北京：中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所,2001.

[9] 蔡玉枝,罗晓燕,苏文周.高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量[J].中国卫生检测杂志 ,2002,12(2):193-194.

[10] Miyazaki T, Nakajima T, Hashimoto T, et al. Determinati on of clenbuterol in animal tissues, by high performance liquid chromatography[J]. J Food Hyg Society of Japan, 1995,36(2):269-273.

[11] HHD Meyer, L Rinke, I Dursch. Residue screening for the β-agonists clenbuterol, aslbutamol and cimaterol in urine using enzyme immunoassay and high-performance liquid chromatography[J].Jchromatogram,1991,564:551-556.

[12] 黄宏男 ,付武胜,林清.高效液相色谱加酶联免疫吸附法检测鲜冻禽产品中的盐酸克伦特罗[J].海峡预防医学杂志 ,2002,8(1):51-52.

[13] 吴银良,李晓薇,刘素英,等.气象色谱-质谱法测定肝脏组织中盐酸克

伦特罗和盐酸莱克多巴胺[J].分析化学 ,2006,34(8):1083-1086.

[14] 王红.气象色谱-质谱法检测动物肝脏组织中盐酸克伦特罗 [J].中国卫生检验杂志,2007,17(8):1409-1410.

[15] 肖红玉,刘国艳,史贤明.盐酸克伦特罗的检测方法[J].中国饲料,2005(12):31-33.

[16] 刘国艳,柴春彦. 动物性产品中盐酸克伦特罗（瘦肉精）检测方法研究进展[J].动物科学与动物医学 ,2002,19(4):32-34.

[17] Pizaariello A, Stred’anskyM, Stred’ansky S, et al. A solid binging matrix/molecularly imprinted polymer-based sensor system for the determination of clenbuterol in bovine liver using differential- pulse voltammetry [J ]. Sensors and Actuators B, 2001,76:286-294.

[18] 刘国艳,柴春彦,朱建国,等.用于检测盐酸克伦特罗残留的免疫传感器感受器部件的研制[J].中国兽医科技 ,2004,34(6):64.

[19] Gausephol C, Blaschke G. Steroselective determination of clenbuterol residues inhumanurine by capillary electrophoresis[J].Journal of chromatography,1998,713:443-446.

猪肉中克伦特罗的检测篇3

增强化学发光酶免疫法对猪肉中盐酸克伦特罗的检测

作者：王硕;李细芬;生威;张燕;杨泽琳;方国臻

作者机构：天津科技大学,食品工程与生物技术学院,食品营养与安全省部共建教育部重点实验室,天津,300457;天津科技大学,食品工程与生物技术学院,食品营养与安全省部共建教育部重点实验室,天津,300457;天津科技大学,食品工程与生物技术学院,食品营养与安全省部共建教育部重点实验室,天津,300457;天津科技大学,食品工程与生物技术学院,食品营养与安全省部共建教育部重点实验室,天津,300457;天津科技大学,食品工程与生物技术学院,食品营养与安全省部共建教育部重点实验室,天津,300457;天津科技大学,食品工程与生物技术学院,食品营养与安全省部共建教育部重点实验室,天津,300457

来源：分析测试学报

ISSN：1004-4957

年：2010

卷：029

期：003

页码：215-219

页数：5

中图分类：R446.6

正文语种：chi

关键词：直接竞争;化学发光酶免疫法;克伦特罗;猪肉

摘要：建立了猪肉中克伦特罗(CLB)的直接竞争化学发光酶免疫检测(dc-CLEIA)方法.通过优化离子强度、pH值确立了化学发光酶免疫法的标准曲线,优化后dc-CLEIA的检出限可达0.02 μg/L.猪肉中的盐酸克伦特罗用高氯酸提取、SPE净化后绘制基质曲线,基质曲线与标准曲线吻合,说明基质影响基本消除.测定0.10、1.0、5.0 μg/kg 3个水平的添加回收率,平均回收率为83% ～98%,批内与批间的相对标准偏差均小于15%.进一步研究了dc-CLEIA与HPLC两种方法测定猪肉样品的相关性,结果显示两者测定结果相关性良好,r=0.964 7,说明所建立的直接化学发光酶免疫方法可用于实际样品的检测,结果准确可靠.

推荐访问:猪肉 克伦 检测 猪肉中克伦特罗检测 猪肉中克伦特罗的检测 猪肉中克伦特罗含量的测定